金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)Z结构域串联体的克隆、表达和筛选

• 作者: 万一 张志敏 张月娟 张琨 王军 王琰 訾静
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 金黄色葡萄球菌蛋白A Z结构域 串联 蛋白产量 吸附载量
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 1500-1510
• 语种: 中文

摘要

筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白A (SpA)用于制备抗体纯化亲和介质.首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白A (SpA)的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因,将目的基因分别克隆至pET-22b表达载体并转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,获得不同串联个数的Z结构域基因工程菌,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化得到Z结构域单体和二-五串体蛋白.纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质,对人免疫球蛋白G (IgG)进行分离纯化.分析比较Z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异.结果表明,构建的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白,制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人IgG.增加Z结构域串联数,重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高,其中,重组四串体蛋白产量大(160 mg/10 g湿菌体),对抗体的吸附载量高(34.4 mg人IgG/mL胶),更适合作为配基用于亲和层析介质的制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张琨	陕西省微生物研究所分子生物学研究中心	20	32	3.0	4.0
2	张月娟	陕西省微生物研究所分子生物学研究中心	12	34	3.0	5.0
3	王琰	陕西省微生物研究所分子生物学研究中心	17	61	4.0	6.0
4	张志敏	陕西省微生物研究所分子生物学研究中心	20	75	6.0	7.0
5	万一	陕西省微生物研究所分子生物学研究中心	37	127	7.0	10.0
6	訾静	陕西省微生物研究所分子生物学研究中心	14	44	4.0	6.0
7	王军		15	29	3.0	4.0