登革病毒特异性抗原片段的筛选鉴定及其ELISA方法的建立

• 作者: 任瑞文 唐博恒 方美玉 洪文艳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 抗原表位 原核表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 369-373
• 分类号: R373
• 字数: 4387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.04.019

摘要

目的 筛选、鉴定登革病毒共同及型特异性抗原,用纯化抗原建立检测登革病毒抗体的ELISA方法.方法 分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎及黄热病毒M、E、NS1蛋白进行分析,预测可能的抗原表位.并根据表位位置和氨基酸序列的相似性,分析登革病毒的共有及型特异性抗原表位,并参考GenBank中的序列信息进行比对,分析其在不同登革病毒株中的保守性.然后选择预测得分值较高的表位,利用pET32a、pMAl-c2x原核表达系统进行原核表达,Western blot验证其免疫学反应特异性.Western blot检测阳性抗原片段经亲和纯化后,包被ELISA微孔板,并对ELISA反应条件进行系统优化.结果经系统的生物信息学分析,共预测获得登革病毒抗原表位18个,登革病毒型特异性抗原表位25个,并对其中得分值较高的5段进行了高效表达,经Western blot分析,获得登革1～4型(Den-Ag5),登革2、4型(Den-Ag3),登革1～3型(Den-Ag2)病毒共同抗原片段各一段,登革1、2、4型( Den-Ag1、Den-Ag4)共同抗原片段两段,与流行性乙型脑炎病毒、黄热病毒及所用甲病毒多克隆抗体均无交叉反应.选择Den-Ag5、Den-Ag1和Den-Ag2作为检测用抗原,建立了检测登革病毒抗体的ELISA方法,初步应用表明,所建立方法具备良好特异性,可检测50～200倍稀释的患者血清,S/N比值均在15以上.结论 经系统筛选,获登革病毒特异性抗原片段5段,并建立了检测登革病毒抗体的ELISA方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任瑞文		39	115	6.0	7.0
2	方美玉		57	388	10.0	15.0
3	洪文艳		33	91	5.0	7.0
4	唐博恒		49	109	6.0	8.0