Ad-XBP1S重组腺病毒对ATDC5细胞周期与凋亡的效应研究

• 作者: 刘艳娜 周菁华 张鹏 郭风劲 韩晓凤
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: X盒结合蛋白1 重组腺病毒 ATDC5细胞 细胞凋亡 增殖
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 326-332
• 页数: 7页
• 分类号: R373
• 字数: 5283字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.h5.003

摘要

目的 构建重组人剪接型X盒结合蛋白1 (X-box binding protein 1 spliced,XBP1S)并探讨其对软骨祖细胞ATDC5周期和凋亡的影响.方法 应用pAdEasyTM腺病毒载体系统,构建得到XBP1S基因全长的重组穿梭质粒pAdTrack-XBP1S,通过电转法同腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-XBP1S.随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-XBP1S.用直接PCR法鉴定重组腺病毒.体外感染软骨祖细胞ATDC5,观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪(FCM)分别在加入毒胡萝卜素(tunicamycin,TM)和不加入TM的条件下,检测重组腺病毒Ad-XBP1S对ATDC5细胞周期和凋亡的影响.结果 酶切鉴定和PCR证实成功构建了重组腺病毒质粒pAd-XBP1S.FCM检测结果表明,在ERS条件下,Ad-XBP1S实验组ATDC5细胞G1(60.70％)期细胞比例低于TM (87.78％)、Ad-GFP对照组(85.24％) (P＜0.05),Ad-XBP1S实验组ATDC5细胞S期(26.64％)高于TM(6.69％)、Ad-GFP对照组(7.35％)(P＜0.05)；TM刺激诱导ERS条件下,感染Ad-XBP1S腺病毒上清后,ATDC5细胞的凋亡率为7.81％,与TM (33.32％)、Ad-GFP对照组(25.95％)比较,差异具有显著性(P＜0.05).结论 含XBP1S基因的重组腺病毒感染ATDC5细胞后,可加速ATDC5细胞周期的转化并抑制其凋亡.为后续研究XBP1S生物学功能奠定了基础.