水稻纹枯病菌6-磷酸葡萄糖胺合成酶基因的克隆、测序及表达分析

• 作者: 刘永锋 刘邮洲 张荣胜 方先文 王晓宇 罗楚平 聂亚锋 陈志谊 陈忠明
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻纹枯病菌 6-磷酸葡萄糖胺合成酶 活性物质 克隆表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 137-143
• 分类号: Q755|S435.111.4+2
• 字数: 4930字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7216.2012.02.002

摘要

为筛选新型水稻纹枯病菌GlmS活性抑制物质,采用3′RACE和5′RACE克隆了水稻纹枯病菌GlmS的基因组DNA序列和完整的cDNA序列.GlmS基因组DNA序列全长2529bp,含有8个内含子；GlmS cDNA序列全长2094bp,推测编码一个含有697个氨基酸残基,分子量约为76.7kD的蛋白质.生物信息学分析表明水稻纹枯病菌GlmS含有1个谷氨酰胺氨基转移酶结构域和2个葡萄糖异构酶结构域.采用大肠杆菌重组融合表达GlmS,重组蛋白的分子量经过葡聚糖凝胶层析和SDS-PAGE电泳测得分别为306kD和77kD,表明GlmS是由4个相同大小亚基组成的多聚酶复合体.重组蛋白的酶学性质研究表明其最适反应温度为37℃,最适pH为6.4,42℃下的半衰期为1h,在pH5.5～7.5时比较稳定.GlmS催化反应能被己糖胺通路末端产物鸟苷氮乙酰葡萄糖胺反馈抑制.