花生2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶基因VTE3的克隆及多态性分析

• 作者: 万勇善 刘风珍 郭安强
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 花生 维生素E 2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶 基因克隆
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1685-1695
• 分类号: S828
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.09.003

摘要

[目的]分离花生2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶(MPBQ MT)基因VTE3,揭示其分子生物学特征及遗传多态性.[方法]利用EST拼接、RT-PCR以及以DNA为模板的PCR扩增技术,从花生属栽培种中分离VTE3全长cDNA;从不同类型栽培品种和花生属花生区组二倍体野生种(Arachis duranensis和A,ipaensis)中分离VTE3全长DNA,进行VTE3序列多态性分析,并构建VTE3的进化树.[结果]从3个栽培品种中分别克隆得到2条VTE3cDNA序列(命名为rVTE3-1和rVTE3-2),rVTE3-1和rVTE3-2的编码区长均为1059bp,二者同源性97.8％,存在10个变异位点,其中8个为SNP变异；二者均编码351个氨基酸,氨基酸序列同源性98.6％,存在5个氨基酸差异,从13个栽培品种分别克隆得到2条VTE3 DNA序列(命名为gVTE3-1和gVTE3-2),13个品种间gVTE3-1的同源性为99.9％,gVTE-2的同源性为100％.其中丰花2号gVTE3-1序列长2710bp,存在3个内含子,分别位于44-163、772-1295和1603-2437bp处；gVTE3-2序列长2706bp,也存在3个内含子,分别位于44-169、778-1291和1599-2433bp处.丰花2号gVTE3-1和gVTE3-2同源性96.6％,内含子区域存在36个SNP位点和3个限制性内切酶识别的多态性位点.从A,duranensis分离的VTE3 DNA序列命名为gVTE3-A,从A,jpaensis分离的VTE3DNA序列命名为gVTE3-B.利用栽培种丰花2号gVTE3-1和gVTE3-2以及野生种gVTE3-A和gVTE3-B4条DNA序列进行进化分析,推测序列gVTE3-1和gVTE3-2分别来自丰花2号的A、B染色体组,花生MPBQMT氨基酸序列与其它物种的同源性较高,具有很强的保守性,[结论]本研究克隆了花生VTE3的全长cDNA和DNA;推断栽培品种的gVTE3-1和gVTE3-2分别来自A、B染色体组,不同染色体组的VTE3多态性位点丰富；不同栽培品种间等位基因核苷酸序列差异很小,所检测13个栽培品种的gVTE3-1以及野生种的gVTE3-A间存在等位变异,13个栽培品种的gVTE3-2以及野生种gVTE3-B间未发现等位变异.