磁珠法半自动提取全血基因组DNA条件的优化

• 作者: 凌洁 张丹丹 张帅 朱益民 来茂德 王昊
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 自动化 磁石 DNA/分离和提纯 血液 基因组文库 正交试验 乙醇 细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 320-326
• 分类号: R394-33
• 字数: 4725字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2012.03.015

摘要

目的:探讨磁珠法提取基因组DNA的影响因素,建立快速、高效、批量提取全血基因组DNA的优化方案.方法:使用磁珠法核酸自动提取系统从全血中提取基因组DNA,紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度.采用正交试验设计分析裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个因素的主效应和全血量与裂解时间、磁珠量,裂解时间与磁珠量的二阶交互作用对所提取DNA浓度和纯度的影响.结果:裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个主效应对DNA浓度的影响均存在统计学差异(P＜0.05),当裂解时间为15 min,全血量为100μl,磁珠量为80μl,乙醇浓度为80％时,DNA平均浓度最高.磁珠量、裂解时间和全血量的交互作用对DNA OD260/OD280的比值有影响(P=0.008和P=0.013).当磁珠量为40μl,裂解时间为15 min,全血量为100μ1时,OD260/OD280的比值较好.磁珠量和乙醇浓度影响DNA OD260/OD230的比值(P=0.017和P＜0.05),磁珠量为40μl,乙醇浓度为80％时,OD260/OD230的比值更好.结论:当DNA得率优先考虑时,可以选择裂解时间15 min、全血量100μl、磁珠量80μl、乙醇浓度80％的提取条件；而对DNA纯度要求较高时,可以将磁珠量改为40μl,以获得最优DNA提取效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王昊	浙江大学医学院病理学与病理生理学系	46	413	10.0	19.0
2	张帅	浙江大学医学院病理学与病理生理学系	38	771	10.0	27.0
3	朱益民	浙江大学医学院流行病与卫生统计学系	66	496	13.0	17.0
4	来茂德	浙江大学医学院病理学与病理生理学系	128	1122	16.0	26.0
5	张丹丹	浙江大学医学院病理学与病理生理学系	15	51	3.0	7.0
6	凌洁	浙江大学医学院流行病与卫生统计学系	2	35	2.0	2.0