家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

• 作者: 恽时锋 王芳 胡佳佳 胡波 范志宇
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 兔 支气管败血波氏杆菌 百日咳杆菌粘附素(PRN) 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 28-32
• 分类号: R332
• 字数: 3898字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2012.02.007

摘要

目的 表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法.方法 参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段.将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21( DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法.结果 成功克隆了prn全基因序列,并在E.coli BL21( DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性.应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法.试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1:40.结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	恽时锋	南京军区南京总医院比较医学科	59	544	13.0	20.0
2	王芳		2	10	2.0	2.0
3	范志宇		2	10	2.0	2.0
4	胡佳佳		1	3	1.0	1.0