家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立

• 作者: 刘涛 恽时锋 王芳 胡波 范志宇 赵宁
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 兔 支气管败血波氏杆菌 坏死毒素(DNT) 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 47-51
• 分类号: R33
• 字数: 4070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2011.04.011

摘要

目的 表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法.方法 参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段.将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-28a(+)载体中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNTI抗体的ELISA方法.结果 成功克隆了dntN-端的基因序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白DNT1具有良好的抗原性.应用重组蛋白DNTI为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法.试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25μg/mL,最适血清稀释度为1:100.结论 建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础.