CHO-hGPR91工程细胞株的构建及鉴定

• 作者: 刘永学 刘超 胡明 陈曦 韩春光
• 来源期刊: 国际药学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: G蛋白偶联受体 GPR91 工程细胞株
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 507-511
• 页数: 5页
• 分类号: R349.5|R962.1
• 字数: 3819字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带hGPR91蛋白表达序列的pcDNA3.1(+)-hGPR91表达载体,并将其转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中,经筛选获得CHO-hGPR91工程细胞株,并对工程细胞株表达受体功能进行初步鉴定.方法 采用PCR法扩增hGPR91全长开放阅读框,通过T4连接酶将其连接到载体pcDNA3.1(+)上,再通过Lipofectamine 2000将重组载体转染入CHO细胞中,并以抗生素G418加压筛选,RT-PCR及Western印迹法检测工程细胞株中hGPR91 mRNA及蛋白的表达情况,以Fluo4-AM荧光染料检测琥珀酸对细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响.结果 所构建CHO-hGPR91工程细胞株能够成功表达hGPR91的mRNA及蛋白,在琥珀酸的刺激下能够明显引起工程细胞株[Ca2+]i的变化;而空载体pcDNA3.1(+)转染CHO细胞所得的CHO-pcDNA3.1(+)细胞则无上述效应.结论 成功构建了CHO-hGPR91工程细胞株,琥珀酸作为GPR91的特异性配体,能够明显改变工程细胞株的[Ca2+]i,为进一步研究GPR91的功能及针对以GPR91为靶点的药物研发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡明	海军总医院海战伤救治研究中心	30	161	5.0	11.0
2	刘超	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	24	191	8.0	13.0
3	韩春光	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	26	91	6.0	8.0
4	刘永学	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	67	624	11.0	23.0
5	陈曦	安徽医科大学研究生学院	12	57	3.0	7.0