乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达

• 作者: 乔自林 冯若飞 凡静静 张晓媛 张海霞 李向茸 李明生 林贵鸿 樊得英 马忠仁
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 乙型脑炎病毒 E蛋白基因 绿色荧光蛋白 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 600-605
• 页数: 6页
• 字数: 5007字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.07.007

摘要

目的 构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV,旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况,为进一步深入研究提供基础资料.方法 通过RT-PCR扩增目的基因,酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGFP-C1-JEV重组表达载体,利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞,观察绿色荧光标记蛋白表达情况,同时提取细胞RNA,检查目的基因转录表达情况,并利用免疫组化和Western blot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性.结果 重组质粒pEGFP-C1-JEV构建成功,转染至BHK-21细胞中,绿色荧光标记蛋白正常表达,表达率较高,RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达,表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中,且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合.结论 pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达,且对细胞生长和形态不产生影响,真核表达抗原具有良好的抗原性,本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料.