低氧诱导因子-1α慢病毒载体的构建及其在骨髓基质干细胞内表达的检测

• 作者: 何家才 周健 张凯 王元银 王瀛 邹多宏
• 来源期刊: 口腔颌面外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 低氧诱导因子1α 慢病毒载体 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 323-327
• 页数: 5页
• 分类号: Q782|Q344.13
• 字数: 3568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4979.2012.05.004

摘要

目的:构建低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的慢病毒载体(Lenti-HIF-1α),转染骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)后,检测HIF-1α在BMSCs内的表达,并鉴定其位置.方法:根据人的HIF-1α基因(NM_001530)序列行引物设计及序列片段的PCR扩增,将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1 α.将目的基因PCR产物和目的载体用NheI和BamHI分别进行酶切,对质粒进行鉴定.采用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti-HIF-1α (Lenti-LacZ为对照组).检测慢病毒滴度后,转染BMSCs,检测目的基因的表达.通过细胞免疫组织化学法观察HIF-1α在BMSCs内的位置.结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1α构建成功.用Lenti-HIF-1α转染BMSCs细胞,0、1、4、7、14和21 d后qPCR检测.结果表明HIF-1α在转染后的第4天开始有明显的过表达,且持续到第21天.细胞免疫组织化学结果显示目的基因位于BMSCs的核内.结论:成功构建了慢病毒载体Lenti-HIF-1α,且转染的目的基因位于BMSCs细胞核内,为HIF-1α介导的BMSCs进行体内实验研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王元银	安徽医科大学口腔医学院口腔颌面外科	101	342	8.0	11.0
2	周健	安徽医科大学口腔医学院口腔颌面外科	119	561	11.0	15.0
3	何家才	安徽医科大学口腔医学院口腔颌面外科	75	313	10.0	13.0
4	张凯	蚌埠医学院附属第一人民医院口腔科	68	186	7.0	8.0
5	王瀛	安徽医科大学口腔医学院口腔颌面外科	1	1	1.0	1.0
6	邹多宏	安徽医科大学口腔医学院口腔颌面外科	7	41	4.0	6.0