杂合抗菌肽LPCB在毕赤酵母中的表达条件优化

• 作者: 乔代蓉 何桂桦 冯顺利 尤芳芳 曹毅 李增婷 林强 谢力
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 杂合抗菌肽 Lfcin-Pro-CecropinB 毕赤酵母 表达条件优化
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 65-69
• 页数: 5页
• 分类号: Q936|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2012.00065

摘要

为获取能表达具有天然活性的杂合抗菌肽的重组酵母菌,确定其最佳表达条件,将构建好的重组酵母表达载体pPICZα-A-CecropinB (1～10) -Magainin2( 1～12)(简称pPICZα-A-CBMA)和pPICZα-A-Lfin-Pro-CecropinB(简称pPICZα-A-LPCB)经SacⅠ线性化处理,分别电转入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris X-33,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,PCR扩增验证,甲醇诱导表达.采用抑菌圈法初步测定产物活性,优化杂合肽LPCB诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度、培养基pH等表达条件,传代检测其质粒稳定性.结果显示,基因工程菌P.pastoris X-33/pPICZα-A-CBMA和P.pastoris X-33/pPICZα-A-LPCB成功构建.表达产物前者抑菌活性微弱,后者抑菌活性良好.杂合肽LPCB的最佳表达条件为:25℃,pH中性培养,每24 h添加0.5％(V/V,ψ)甲醇,诱导表达72 h.重组酵母菌pPICZα-A-LPCB在培养超过100代后,未发生质粒丢失.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乔代蓉		72	604	13.0	24.0
2	曹毅		93	714	14.0	25.0
3	林强		8	48	3.0	6.0
4	李增婷		1	0	0.0	0.0
5	谢力		1	0	0.0	0.0
6	冯顺利		4	0	0.0	0.0
7	尤芳芳		2	6	1.0	2.0
8	何桂桦		1	0	0.0	0.0