甘蓝型油菜BnADC基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘王辉 李晨 洪林 胡长清 袁亚宾 闫晓红 陈春丽 魏文辉
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蓝型油菜 精氨酸脱羧酶基因 同源克隆 RACE 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 8-15
• 分类号: S565.403
• 字数: 5128字
• 语种: 中文

摘要

利用同源克隆和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术从甘蓝型油菜中克隆到精氨酸脱羧酶( Arginine decarboxylase,ADC)基因cDNA全长序列,命名为BnADC.BnADC全长为2 649bp,包含344bp的5 '非翻译区(5 ' Untranslated region,5'-UTR)、226bp的3 '非翻译区(3'Untranslated region,3'- UTR)和2 079bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码75.1kD的蛋白质.5'- UTR中含有12bp的uORF(Upstream open reading frame),编码MIRE 4个氨基酸.氨基酸同源性比对表明,BnADC蛋白与其他植物ADC蛋白具有很高的相似性,与芥菜的同源性高达93％；系统进化树分析表明,BnADC与芥菜、拟南芥的ADC亲缘关系较近.在获得全长cDNA的基础上,构建融合表达载体pET30a(+)- BnADC,转化大肠杆菌(Escherichia coli表达菌株BL21( DE3),SDS -PAGE检测到一个约81.1kD的融合蛋白被E.coil表达,且融合蛋白主要存在于菌体沉淀中.