黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)的克隆及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达

• 作者: 刘德武 吴珍芳 蔡更元 阳建辉 黄妙容 黄晓灵
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 黑曲霉 β-葡萄糖苷酶BGL1 克隆表达 CHO细胞 酶活测定
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1449-1456
• 页数: 8页
• 字数: 5363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.12.012

摘要

β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一,被认为是纤维素糖化的限速酶.本研究克隆黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1),并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达分析.以GenBank上黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)序列为模板,设计特异性引物,从黑曲霉(Asperjillus niger)基因组DNA中扩增目的片段,通过SOE-PCR的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽序列sp和bgl1相连,成功构建分泌型真核表达载体pc6-sp-bgl1,利用脂质体介导法瞬时转染哺乳动物CHO细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,最后通过DNS(dinitrosalicylic acid)法测定表达产物酶学活性.PCR扩增得到的目的序列与文献报道序列的相似性为91％,预测的蛋白氨基酸序列相似性为99％.RT-PCR和Western blot检测证明,外源基因bgl1在CHO细胞中得到表达；分泌到细胞培养上清中的重组蛋白对水杨素的水解活性为1.74 U/mL,说明重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性.本研究克隆得到黑曲霉bgl1基因并在哺乳动物CHO细胞中进行表达,为β-葡萄糖苷酶在单胃动物中的利用提供了基础研究资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阳建辉		19	61	5.0	6.0
2	刘德武	华南农业大学动物科学学院	79	381	11.0	17.0
3	吴珍芳	华南农业大学动物科学学院	56	312	9.0	15.0
4	蔡更元	广东省农业科学院畜牧研究所	17	50	4.0	6.0
5	黄晓灵	华南农业大学动物科学学院	3	16	3.0	3.0
6	黄妙容	华南农业大学动物科学学院	2	10	2.0	2.0