微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析

• 作者: 周鹏 呼高伟 张国恩 曹薇 李艳 秦培兰 米荣升 苏庆美 黄燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 微小隐孢子虫 抗原表位 重叠延伸PCR 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 36-43
• 页数: 8页
• 分类号: S852.723|S852.43
• 字数: 5344字
• 语种: 中文

摘要

应用多个抗原袁位预测软件对微小隐孢子虫CP15、P23和CP15/60三个子孢子表面抗原的氨基酸序列进行T细胞袁位预测及分析,从中选取了三个抗原表位富集的基因片段,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)将该三个基因片段串联在一起,各基因片段之间以柔性氨基酸(GGGGS)碱基序列链接,得到的拼接片段命名为CpTm.将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pET-CpTm,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.结果成功地构建了CpTm串联基因并在大肠杆菌中以可溶形式高效表达,质谱分析表明重组表达蛋白包含了上述三个抗原的氨基酸序列.Western blot分析显示该重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清及隐孢子虫鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重组表达蛋白免疫兔血清识别,制备的抗血清能被重组蛋白特异性识别,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为多表位疫苗的研制奠定了基础.