外源性分化抑制因子Id2在C2C12细胞中的表达

• 作者: 余磊 张黎声 欧阳钧 赖桂华 邱小忠
• 来源期刊: 广州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: Id2基因 C2C12细胞 转染 真核表达载体 大鼠
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R318.17
• 字数: 3260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1836.2012.04.001

摘要

目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,并观察外源性Id2基因C2C12细胞中的表达.方法:RT-PCR扩增出Id2全长cDNA,T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoR I酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;通过电穿孔转染法将外源性Id2基因导入C2C12成肌细胞中.分别于转染4、8、12、24、36、72 h后通过荧光倒置显微镜下观察细胞整体情况,并计算转染效率.结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2 cDNA片段,获得高转染率和高表达外源性Id2基因的C2C12细胞,转染8h时,转染效率约为(10.5±2.8)％;转染12 h后,转染效率约为(20.9±3.1)％;转染24 h后,转染效率最高,约为(60.8±3.2)％.结论:成功构建了同时携带有G418筛选位点和Id2基因的真核表达载体;并获得高表达外源性Id2基因的C2C12细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱小忠	南方医科大学临床解剖学研究所广东省组织构建与检测重点实验室	32	132	7.0	9.0
2	余磊	南方医科大学临床解剖学研究所广东省组织构建与检测重点实验室	30	164	8.0	11.0
3	张黎声	上海中医药大学解剖学教研室	29	143	8.0	11.0
4	欧阳钧	南方医科大学临床解剖学研究所广东省组织构建与检测重点实验室	45	309	11.0	16.0
5	赖桂华	安徽省蚌埠医学院人体解剖学教研室	1	0	0.0	0.0