北柴胡UGT基因的克隆及其过量表达和RNAi转基因载体的构建

• 作者: 孙鹏 徐洁森 徐艳红 赵立子 隋春 魏建和
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 北柴胡 UGT基因 转基因载体
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 资源与鉴定
• 页码范围: 558-563
• 分类号: S567.79
• 语种: 中文
• DOI: 10.4268/cjcmm20120504

摘要

目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因,构建其过表达和抑制表达的转基因载体,为通过转基因验证其功能奠定基础.方法:在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆.设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增UGT基因的ORF和部分片段后,酶切,分别插入到pCAMBIA-SUPER1 300和pHANNIBAL中.重组的pHANNIBAL经Not(I)酶切后插入到pART27中.最终以构建出过表达和抑制表达的转基因载体.结果:扩增到了北柴胡1个UGT基因全长cDNA克隆,构建了这一基因的过表达和抑制表达转基因载体.结论:通过UGT基因的全长cDNA克隆和转基因载体构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础.