建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法

• 作者: 夏钢 王宇萌 祝静静 鲍秋颖
• 来源期刊: 华东师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 萤火虫萤光素酶 蛋白表达 蛋白纯化 细胞活性
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 45-53,84
• 页数: 10页
• 分类号: Q814.9
• 字数: 6237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5641.2012.05.007

摘要

运用PCR的方法,从萤火虫萤光素酶基因载体pGL4.26扩增萤火虫萤光素酶基因片段,将其插入连接于原核表达载体pET24a中,构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后,将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21( DE3)中,获得阳性重组菌BL21/pET24a-Luc.IPTG诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶.该目的蛋白活性用Bright-GloTM试剂进行验证并用于建立一种基于测量ATP含量的检测细胞生物活性的方法.与传统的细胞生物活性检测试剂盒MTT,CCK-8以及Alamar Blue比较,该方法具有反应迅速、活力高、灵敏度好、生产方便的优点,具有实际应用的潜力.