孕烷X受体应答元件萤光素酶报告基因的构建及活性检测

• 作者: 冯帆 史国兵 司文 张帆 杨予涛 杨俊兰 杨永平 王春平 高旭东
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 孕烷X受体 孕烷X受体应答元件 萤光素酶报告基因 转录活性
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 166-170
• 页数: 5页
• 分类号: R73-3
• 字数: 3917字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2015.02.019

摘要

目的 建立孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)应答元件萤光素酶报告基因,并检测其活性.方法 利用化学合成方法得到五聚体PXR应答元件(evened repeat elelment-6,ER-6元件)5和(direct repeat element-3,DR-3)5序列;将五聚体PXR应答元件序列(ER6或DR3)克隆至pGL3-Promoter载体上;利用萤光素酶报告基因系统检测PXR应答元件报告基因的活性.结果 PXR应答元件萤光素酶报告基因具有明确的活性.PXR激动剂茴香霉素能够剂量依赖地诱导ER6-Luc(R2=0.95;P=0.002 2)和DR3-Luc (R2=0.96;P=0.000 91)报告基因的活性,其EC50值分别为(0.11±0.04)μ mol/L和(0.13±0.06)μ mol/L;PXR拮抗剂酮康唑能够剂量依赖地降低茴香霉素诱导的ER6-Luc (R2=0.97;P=0.000 85)和DR3-Luc (R2=0.98;P=0.000 11)的活性,IC50值分别为(0.71±0.11)μmol/L和(1.73±0.15)μmol/L.结论 成功构建了PXR应答元件报告基因,建立了PXR转录活性的检测方法.