细胞色素氧化酶3A4启动子报告基因的构建及其活性检测

• 作者: 冯帆 司文 张帆 杨予涛 杨俊兰 杨永平 王春平 高旭东
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞色素氧化酶3A4 孕烷X受体 萤光素酶报告基因 转录活性
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 160-165
• 页数: 6页
• 分类号: R73-3
• 字数: 4039字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2015.02.018

摘要

目的 建立细胞色素氧化酶(cytochrome P-450,CYP)3A4启动子报告基因并在孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达阳性的肿瘤细胞中检测其转录活性.方法 利用PCR扩增CYP3A4的启动子区远端调控序列(-7836/-7208)和近端调控序列(-362/+52)序列;将上述序列克隆至pGL3-Promoter载体上;利用萤光素酶报告基因系统检测CYP 3A4报告基因的活性.结果 在肝癌细胞系中,PXR的激动剂利福平能够剂量依赖性地诱导远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和近端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.95;P=0.011)的活性,EC50为(5.65±0.58)μmol/L和(8.91±1.12)μ mol/L;PXR的拮抗剂酮康唑能够剂量依赖性地抑制利福平诱导的远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和PXRE-Luc(R2=0.92;P=0.003 4)活性,IC50为(0.55±0.08)μmol/L和(0.94±0.14)μmol/L.此外,多种化疗药物(PXR的潜在配体)能够在PXR阳性的肿瘤细胞系中诱导远端调控序列荧光素酶报告基因和近端调控序列荧光素酶报告基因的活性.结论 成功构建了CYP3A4启动子报告基因,在此基础上建立了在不同肿瘤细胞中检测PXR转录活性的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨永平	解放军第三零二医院肝脏肿瘤诊疗与研究中心	43	203	7.0	12.0
2	张帆	解放军总医院肿瘤内科	34	134	6.0	10.0
3	冯帆	沈阳军区总医院药剂科	8	20	2.0	4.0
4	司文	解放军总医院肿瘤内科	3	92	3.0	3.0
5	高旭东	解放军第三零二医院肝脏肿瘤诊疗与研究中心	11	24	4.0	4.0
6	王春平	解放军第三零二医院肝脏肿瘤诊疗与研究中心	17	70	6.0	7.0
7	杨予涛	首都医科大学神经科学研究所	17	12	2.0	3.0