人nm23-H1基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 周卫兵 王智勇 范红渠 邵磊 郝鲁峰
• 来源期刊: 中华老年口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: nm23-H1 重组腺病毒 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5-9
• 分类号: R782
• 字数: 4298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2973.2012.01.002

摘要

目的:构建表达入nm23-H1基因的重组腺病毒载体,并在人胚肾293细胞中进行鉴定.方法:以重组质粒pcDNA3.1-nm23-H1中提取的nm23-H1基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-C MV-nm23-H1,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-nm23-H1,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长nm23-H1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-nm23-H1.大量扩增Ad-nm23-H1病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测nm23-H1基因在293细胞中的转录.结果:经PCR、酶切鉴定及DNA测序结果证实pShuttleCMV-nm23-H1及pAdEasy-nm23-H1质粒正确构建,纯化后的Ad-nm23-H1病毒颗粒感染性滴度为109.5(3.4×109)CCIDs/ml,经RT-PCR扩增出的基因片段,与目的片段大小一致.结论:已成功构建了表达nm23-H1重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范红渠	襄阳市东风汽车公司襄樊医院口腔科	1	1	1.0	1.0
2	周卫兵	襄阳市东风汽车公司襄樊医院口腔科	1	1	1.0	1.0
3	郝鲁峰	襄阳市东风汽车公司襄樊医院口腔科	1	1	1.0	1.0
4	邵磊	襄阳市东风汽车公司襄樊医院口腔科	1	1	1.0	1.0
5	王智勇	襄阳市东风汽车公司襄樊医院美容科	1	1	1.0	1.0