鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立

• 作者: 周霞 张海滨 李恩扩 胡敬东 苏倩倩
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18) 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术·信息技术
• 页码范围: 5-9
• 分类号: Q503
• 字数: 3987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4942.2012.04.002

摘要

将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken intedeukin 18 mature protein,mChIL - 18)基因在原核系统表达,采用Ni - NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白.纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL - 18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法.经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12000,抗原抗体最佳结合时间是1.5h,血清与二抗最适反应时间为1h.阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示,1.5＜ P/N ＜2.0为可疑,P/N＜1.5为阴性.本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础.