携带miR29c重组腺病毒的制备及其促骨髓瘤细胞凋亡作用

• 作者: 张怡堃 李泽良 杨月峰 杨萍 王华 王立生 陈协群
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNAs 细胞凋亡 基因表达 质粒 腺病毒科 骨髓瘤
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 20-25
• 分类号: R733.3
• 字数: 3919字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.01.006

摘要

目的 制备携带miR29c的重组腺病毒Ad5F 11 p-miR29c,评价miR29c对骨髓瘤细胞凋亡的影响.方法 巢式PCR扩增得到hsa-miR29c,将hsa-miR29c基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,得到pShuttle-CMV-miR29c.鉴定正确后,PmeI线性化并转化含Ad5F11p骨架质粒的BJ5183感受态细胞,重组获得腺病毒载体.PacI线性化的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞,制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.以对照病毒Ad5F11p-EGFP感染人骨髓瘤细胞系SKO-007、U266和XG7,通过流式细胞术确定最佳感染复数.Ad5F 11p-miR29c以最佳感染复数感染骨髓瘤细胞,流式细胞术检测miR29c对细胞凋亡的影响.结果 PCR扩增获得miR29c基因,成功将其连接到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,经测序鉴定正确.采用Ad-easy系统,成功构建并制备了CMV启动的重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.流式细胞术结果显示,Ad5F11p-EGFP对SKO-007和U266细胞的最佳感染复数为150 MOI;而XG7为100 MOI.Ad5F11p-miR29c以最佳感染复数感染细胞48 h后,细胞凋亡率升高.SKO-007细胞的凋亡率达到26.5％,XG7细胞的凋亡率达到46.9％.结论 成功制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c,并证实miR29c能够诱导骨髓瘤细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	68	439	13.0	17.0
2	陈协群	第四军医大学西京医院血液科	94	507	11.0	19.0
3	杨萍	第四军医大学门诊部	8	34	3.0	5.0
4	王立生	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	76	410	10.0	16.0
5	李泽良	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	2	2	1.0	1.0
6	杨月峰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	11	20	2.0	4.0