粉尘螨变应原第10组分基因克隆表达及生物信息学分析

• 作者: 周鹰 孙金霞 崔玉宝 杨李 王运刚 马桂芳
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 重组变应原 克隆 基因表达 生物信息学
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 877-881
• 分类号: R384.4
• 字数: 4528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.10.003

摘要

目的:克隆粉尘螨变应原第10组分(Der f 10)基因并建立其原核表达体系.方法:提取粉尘螨总RNA,反转录后经套式PCR扩增出目的基因并克隆至pMD19-T载体测序,将测序正确的目的基因插入表达质粒pET28a,转化E.coli BL21 (DE3)用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白.结果:RT-PCR扩增获得Der f 10,琼脂糖凝胶电泳见一条约888 bp的条带,与参考序列(GenBank No.EU 106617)同源性高达99.8%.将pET28a(+)-Der f 10质粒转化宿主菌E.coli BL21,SDS-PAGE电泳时出现特异性条带,Western blot表明重组蛋白可与抗His-Tag Mab抗体结合.生物信息学软件预测获得的Der f 10重组体由295个氨基酸组成的疏水性蛋白,相对分子质量为34 233.1 Da,二级结构包括α-螺旋(91.86%)、延伸主链(1.36%)和无规卷曲(6.78%),含有5个原肌球蛋白模序分别位于84~101、120~140、145~173、175~198和231~256氨基酸处.结论:获得了Der f 10编码基因,成功建立其原核表达体系,为生产重组变应原用于临床诊断与治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔玉宝		45	110	6.0	9.0
2	周鹰		33	73	4.0	7.0
3	马桂芳		46	136	6.0	8.0
4	杨李		37	62	4.0	5.0
5	孙金霞		33	56	4.0	5.0
6	王运刚		15	11	2.0	2.0