多重PCR-变性高效液相色谱法快速检测结核致病菌群并同步鉴别致病菌种

• 作者: 刘志玲 吴晓薇 朱道中 郭爱珍 陈茹 高小博
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 变性高效液相色谱 结核分枝杆菌复合群 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1504-1510
• 分类号: S854.43
• 字数: 5321字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在运用多重PCR联合变性高效液相色谱(DHPLC)技术原理,建立快速检测人兽结核致病菌群并鉴别主要致病菌种的新方法.建立了四重PCR-DHPLC方法,可同时检测结核分枝杆菌复合群(MTC)特异的IS6110和IS1081插入序列、结核分枝杆菌特异结构基因和牛分枝杆菌特异结构基因共4个目标基因.采用13种分枝杆菌标准菌株和分离株以及23种常见微生物样品进行特异性试验,采用纯化标准菌株DNA以及克隆了扩增序列的重组质粒DNA进行检测灵敏度试验,采用从临床疑似发病牛群采集的牛组织样品进行临床检测试验,并与细菌分离培养方法进行比对.结果表明:所建立的多重PCR-DHPLC方法能特异检测MTC并准确鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌,而对其它11种分枝杆菌以及23种常见微生物样品均呈典型阴性检测结果；检测灵敏度达到每个反应102～103基因拷贝或3.6～6.8fg DNA模板浓度.采用该法从39份临床疑似样品中检出33份MTC阳性并检出其中28份为牛分枝杆菌阳性,而培养法检出21份阳性样品.采用该法临床检测全程可缩短至1d之内,其中对纯化DNA样品的检测分析可在2h内完成.本研究为人兽结核致病菌(群)的快速检测鉴别提供了新型分子生物学方法,所建立的四重PCR-DHPLC方法能实现快速检测结核分枝杆菌复合群并鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭爱珍		86	498	12.0	18.0
2	高小博		5	41	4.0	5.0
3	陈茹		25	163	8.0	11.0
4	吴晓薇		11	52	3.0	7.0
5	朱道中		11	55	4.0	7.0
6	刘志玲		8	36	4.0	6.0