酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼耐药K562细胞系的建立及其耐药特征

• 作者: 冯帆 刘洪英 张琼 李松 王莉莉
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 伊马替尼 酪氨酸激酶抑制剂 K562细胞 抗药性,肿瘤
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 563-569
• 分类号: R965.2
• 字数: 5714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2012.04.017

摘要

目的 建立酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼( STI-571)耐药K562细胞系并研究其耐药特征.方法 采用含递增浓度伊马替尼的培养基培养K562细胞,诱导耐伊马替尼K562细胞系(K562R).通过细胞生长曲线、细胞形态和细胞凋亡分析确定耐药细胞是否形成；采用MTT法观察耐药细胞的耐药谱；通过半定量PCR和Western印迹法检测相关基因及蛋白的表达,并通过基因测序分析K562R细胞B细胞受体-c-Abelson (BCR-ABL)激酶区基因序列.结果 成功地将伊马替尼高敏感的K562细胞诱导成K562R,伊马替尼抑制K562和K562R细胞存活的IC50值分别为0.01±0.00和(2.35±0.01) μmol·L-1,耐药倍数为235.0倍.K562R具有一定的交叉耐药性,对高三尖杉酯碱、长春新碱和对柔红霉素的耐药倍数分别为13.2,63.2和11.8倍.K562R可对抗伊马替尼诱导的细胞凋亡,伊马替尼1.0 μmol·L-1培养24 h K562和K562R细胞凋亡率分别为72.1％和18.2％.耐药形成机制研究表明,与K562细胞相比,K562R细胞BCR-ABL基因、多药耐药基因(MDR)和P-糖蛋白基因(p-GP)的表达均明显增加.此外,K562R细胞BCR-ABL基因的第696位发生A→C点突变,该位点突变导致激酶区第231位氨基酸由赖氨酸取代原有的天冬酰胺.结论 成功建立了耐伊马替尼细胞系K562R.K562R细胞具有交叉耐药性和对抗伊马替尼诱导的细胞凋亡等特征.K562R细胞BCR-ABL基因序列发生点突变,MDR和p-GP等基因表达亦明显升高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘洪英	军事医学科学院毒物药物研究所药物合成研究室	22	51	4.0	5.0
2	李松	军事医学科学院毒物药物研究所药物合成研究室	107	673	13.0	21.0
3	王莉莉	军事医学科学院毒物药物研究所药物合成研究室	73	579	12.0	21.0
4	冯帆	军事医学科学院毒物药物研究所药物合成研究室	9	28	4.0	5.0
5	张琼	军事医学科学院毒物药物研究所药物合成研究室	1	8	1.0	1.0