重组金属硫蛋白2A质粒的构建与表达

• 作者: 刘振杰 刘新光 周静 徐宁 熊兴东 赵树勇 郑慧玲 陈维春 骆艳婷
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 金属硫蛋白2A 重组质料 大肠埃希菌
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础实验研究论著
• 页码范围: 513-514,516
• 分类号: R341
• 字数: 2710字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2012.05.001

摘要

目的 构建重组金属硫蛋白2A(MT-2A)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究MT-2A奠定基础.方法 从人骨骼肌细胞cDNA文库中PCR扩增MT-2A基因DNA序列,构建重组表达质粒MT2A-pET32a,PCR与DNA测序法鉴定插入序列;重组细菌用IPTG诱导表达,His-bind亲和层析柱纯化MT-2A蛋白,Western blotting鉴定蛋白特性.结果 扩增获得的MT-2A基因片段长186 bp,DNA测序证实MT2A-pET32a重组质粒构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,Western blotting证实为目的 蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒MT2A-pET32a,在大肠埃希菌内诱导表达并纯化获得MT-2A.