鹅PIT-1基因启动子区转录调控的研究

• 作者: 孙国波 张扬 徐琪 李秀 段修军 毕瑜林 董飚 赵文明 赵荣雪 陈国宏 黄正洋
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅 PIT-1基因 启动子 荧光素酶基因表达载体 转录调控
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 220-225
• 分类号: S835|S831.2
• 字数: 3868字
• 语种: 中文

摘要

为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,PIT-1)启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位.利用前期染色体步移技术扩增得到鹅PIT-1基因的启动子区序列,经PCR扩增,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体(pGL-Basic),制备了一系列启动子缺失体(-1 485/-1 bp、-1 293/-1 bp、-1 014/-1 bp、-775/-1 bp、-561/-1 bp、-353/-1 bp和-206/-1 bp),并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转染GH3细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测.本试验所克隆的PIT-1基因启动子区具有明显的启动子活性,其中-561/-1 bp的启动活性最强,该区域存在有PIT-1、POU3F2、myogenin和GR等多个转录因子结合位点.利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,并且验证了克隆的启动子具有启动活性,找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础.