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禽白血病J亚群病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
禽白血病J亚群病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
作者:
常维山
张伟华
李冰
董征英
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
禽白血病病毒J亚群
荧光定量PCR
病毒分布
摘要:
本研究旨在通过荧光定量PCR方法研究禽白血病J亚群病毒(ALV-J)在家禽体内各个器官的分布.根据ALV-J NX0101毒株基因5 258- 5 510 bp的碱基序列,设计了1对特异性引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为253 bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green Ⅰ染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性,特异性和重复性试验.然后用已建立的方法对人工感染ALV-J的SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、腺胃进行3次重复检测,将Ct值带入标准曲线公式得出各个组织的病毒拷贝数.试验结果表明:标准曲线线性关系R值均为0.991 4,检测极限约为81拷贝质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有ALV-J能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%.通过比较数值以得出胸腺ALV-J基因含量是最高的,肺脏、脾脏、法氏囊含量也比较高,心脏拷贝数最低.自然感染发病鸡各器官ALV-J基因均高于人工感染ALV-J的基因含量.本研究所建立的ALV-J基因实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,初步探讨了禽白血病J亚群病毒在畜禽体内各个器官的病毒分布.这为以后禽白血病的诊断以及治疗提供了重要的技术支持.
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禽白血病
实时荧光定量RT-PCR
Taq Man探针
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文献信息
篇名
禽白血病J亚群病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
来源期刊
畜牧兽医学报
学科
农学
关键词
禽白血病病毒J亚群
荧光定量PCR
病毒分布
年,卷(期)
2012,(7)
所属期刊栏目
预防兽医
研究方向
页码范围
1096-1102
页数
分类号
S852.659.3
字数
3912字
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
常维山
山东农业大学动物科技学院预防兽医细胞免疫实验室
187
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20.0
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2
李冰
山东农业大学动物科技学院预防兽医细胞免疫实验室
8
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张伟华
3
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董征英
山东农业大学动物科技学院预防兽医细胞免疫实验室
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荧光定量PCR
病毒分布
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
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期刊影响力
畜牧兽医学报
主办单位:
中国畜牧兽医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0366-6964
CN:
11-1985/S
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区圆明园西路2号
邮发代号:
82-453
创刊时间:
1956
语种:
chi
出版文献量(篇)
5501
总下载数(次)
6
总被引数(次)
62883
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