荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用

• 作者: 岳华 崔宝玉 李佳桃 李明义 汤承
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 禽白血病病毒 gag基因 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 25-28
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.3
• 字数: 3908字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2008.09.016

摘要

gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR Green I模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法.该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;在8.2×102～8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(Y=3.46X+31.8,r=0.9995);最低可检测82个拷贝的病毒核酸,与普通PCR方法相比,灵敏度高出1000倍.组内CV为0.28%～1.45%;组间CV为2.13%～3.84%:对151例临床疑似样本的检出率为54.9%(83/151).随机选择15份阳性样本PCR产物克隆测序,结果证明扩增片断为ALV的特异序列,与ALV gag基因核苷酸同源性为97.8～98.9%;对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%.鸡群的阳性率为14/14.同时用实时RT-PCR方法和ELISA方法对从种鸡场随机采集的30份100日龄蛋鸡的血清进行检测,实时RT-PCR检测率为5/30,ELISA方法检测率为4/30.本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳华	西南民族大学生命科学与技术学院	187	1071	15.0	23.0
2	汤承	西南民族大学生命科学与技术学院	194	1150	15.0	24.0
3	李明义		13	90	6.0	9.0
4	崔宝玉		12	62	4.0	7.0
5	李佳桃	西南民族大学生命科学与技术学院	2	28	2.0	2.0