产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其鼻腔免疫效果

• 作者: 姜柯安 宋方洲 贺志良 马永平
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产肠毒素大肠杆菌 K88菌毛蛋白 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 原核细胞 基因表达 黏膜免疫
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 疫苗研究
• 页码范围: 1091-1094
• 分类号: R378.2+1|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果.方法 采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.表达的重组K88和LTb蛋白纯化、复性后,进行SDS-PAGE分析.分别用K88单独、K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠,以生理盐水作为对照,每次间隔1周,共4次,末次免疫后10d,分离血清,并收集鼻腔和小肠黏膜冲洗液,间接ELISA法检测各组血清特异性IgG和黏膜sIgA抗体水平.结果 重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组K88和LTb蛋白相对分子质量分别为28 100和12 500,表达量分别约占菌体总蛋白的35％和40％,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度均可达95％以上.K88联合LTb滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性SIgA水平均较K88单独免疫组和对照组明显增高,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在大肠杆菌中高效表达并纯化了重组K88和LTb蛋白,K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后,可增强特异性血清抗体反应,且诱导了黏膜免疫应答,为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋方洲	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	88	309	9.0	12.0
2	马永平	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	35	170	6.0	10.0
3	姜柯安	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	3	10	2.0	3.0
4	贺志良	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	3	10	2.0	3.0