不同浓度超声微泡及质粒对pEGFP-N1-VEGF重组质粒转染效率的研究

• 作者: 丁尚伟 吕清 张丽 王静 覃小娟 谢明星 项飞翔 黄桂
• 来源期刊: 临床心血管病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 超声靶向微泡破坏 基因治疗 浓度 声孔效应
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 临床基础研究
• 页码范围: 382-385
• 页数: 4页
• 分类号: R454.3
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨不同浓度的微泡及质粒对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)存活率及pEGFP-N1-VEGF重组质粒转染率的影响,初步探索最佳的质粒及微泡浓度.方法:将状态良好的HUVEC交叉植入24孔板中,对照组仅进行超声辐照,实验组中加入不同浓度质粒和微泡后进行超声辐照.将不同浓度的质粒和微泡分别两两组合加入各实验组.48 h后锥虫蓝染色检测细胞存活率,荧光显微镜定性观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪定量检测基因转染率,Western blot检测离体细胞中VEGF的表达.结果:实验组中各亚组均有不同程度的荧光.蛋白表达.当质粒浓度≤20 μl/ml时,基因转染率随质粒浓度增加而增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；当质粒浓度＞20 μl/ml时,基因转染率随质粒浓度增加改变不明显,差异无统计意义.细胞存活率与质粒浓度无明显关系.基因转染率随微泡浓度呈先增加后降低的趋势,差异有统计学意义(P＜0.05),当微泡浓度为150 μl/ml对,基因转染率最高；而细胞存活率随微泡浓度的增加而降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测对照组条带显示较弱,各实验亚组有不同程度条带显示,强于对照组.结论:在一定的辐照参数时,不同浓度质粒和微泡基因转染率不同,质粒浓度为20 μl/ml、微泡浓度为150 μl/ml是比较理想的条件,此时的细胞存活率为(85.69±0.27)％,基因转染率为(23.86±0.43)％.