pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达

• 作者: 张聪慧 徐绍业 程芯育 邵晓云 钟海凤 韦睿妮
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: BRCC3基因 绿色荧光蛋白 基因重组 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2019,（19）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2705-2709
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R34
• 字数: 3666字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13820/j.cnki.gdyx.20191754

摘要

目的 构建pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,鉴定并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 根据去泛素化酶BRCC3(人的同源物称为BRCC36)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,利用RT-PCR从小鼠脑组织中提取BRCC3全长基因作为目的DNA片段,选择HindⅢ/Sal I内切酶将目的片段与pEGFP-N1真核表达裁体进行双酶切,然后用T4连接酶连接,导入大肠杆菌经过转化、抗性筛选、质粒提取等过程获得融合的重组质粒,并再次双酶切电泳后初步筛选出可能正确的重组质粒,进而寄送公司进行DNA测序分析,通过DNAMAN软件比对,鉴定出目的基因BRCC3成功插入pEGFP-N1的重组质粒,以脂质体介导法转染HEK293细胞,通过Western blot检测BRCC3蛋白的表达.结果 DNA测序结果显示,pEGFP-N1-BRCC3重组质粒中目的DNA序列及方向完全正确,开放阅读框正确无误,表明重组pEGFP-N1-BRCC3质粒构建成功,将其转染HEK293细胞后,Western blot检测BRCC3蛋白表达明显增加.结论 成功构建了pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,并能在HEK293真核细胞中有效表达,为深入研究BRCC3基因在神经生物学领域的功能提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐绍业	桂林医学院科学实验中心	17	38	4.0	5.0
2	程芯育	桂林医学院研究生学院	2	1	1.0	1.0
3	钟海凤	桂林医学院生物技术学院	3	1	1.0	1.0
4	张聪慧	桂林医学院研究生学院	1	1	1.0	1.0
5	韦睿妮	桂林医学院生物技术学院	1	1	1.0	1.0