pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达

• 作者: 吕雄文 张磊 彭云云 徐涛 李俊 李琳 金涌 黄成
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: NLRC5 COS-7 基因表达 重组质粒 转染
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: R349.64
• 字数: 3807字
• 语种: 中文

摘要

目的构建含NLRC5蛋白功能区的cDNA序列的真核表达载体 pEGFP-C2-NLRC5,并检测其在肾成纤维细胞(COS-7)中的表达。方法采用RT-PCR法从人肝星状细胞(LX-2)中获得 NLRC5蛋白功能区的 cDNA 序列片段,用EcoR玉和BamH 玉双切酶将片段和载体pEGFP-C2双酶切后,酶切产物加入T4连接酶16益连接过夜,构建真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5。将构建成功的pEGFP-C2-NLRC5重组质粒经PCR,限制性内切酶酶切和测序鉴定后用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将其转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达, Western blot法鉴定融合蛋白表达。结果阳性克隆经双酶切法鉴定可见NLRC5基因片段。转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,而且主要分布在细胞质中,Western blot法也可检测到在74 ku处有一明显条带,其大小符合EGFP-NLRC5表达的蛋白( NLRC5蛋白大小约为47 ku,EGFP蛋白大小约为27 ku),表明融合蛋白可在哺乳动物细胞中成功表达。结论成功构建pEG-FP-C2-NLRC5质粒, NLRC5蛋白可在 COS-7细胞中成功表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊	安徽医科大学药学院	493	5712	35.0	53.0
2	张磊	安徽医科大学药学院	138	1347	20.0	30.0
3	吕雄文	安徽医科大学药学院	128	942	15.0	24.0
4	金涌	安徽医科大学药学院	156	1292	18.0	29.0
5	黄成	安徽医科大学药学院	52	485	12.0	20.0
6	李琳	安徽医科大学药学院	15	78	4.0	8.0
7	徐涛	安徽医科大学药学院	24	51	4.0	5.0
8	彭云云	安徽医科大学药学院	3	8	2.0	2.0