重组真核质粒pEGFP-C2-hTudor-SN-SN(1~4)的构建及表达

• 作者: 付雪 何津岩 史雪彬 尹洁 张毅 杨洁 辛灵彪 陈朴 高星杰
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类Tudor-SN蛋白 pEGFP-C2 重组质粒 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 241-245
• 页数: 5页
• 分类号: Q7
• 字数: 4099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.04.000

摘要

目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法将目的 片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2- Tudor-SN-SN (1~4)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的 蛋白的融合表达情况.结果 以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达.结论重组pEGFP-C2- hTudor-SN-SN (1~4)质粒成功构建并表达.