原核质粒pGEX-4T-2-PLEKHQ1及真核质粒pCMV-Myc-PLEKHQ1的构建与蛋白表达

• 作者: 周晨辰 张硌 张鹏飞 陆琤
• 来源期刊: 中国医学装备
• 学科: 医学
• 关键词: 基因PLEKHQ1 pGEX-4T-2载体 pCMV-Myc载体 重组质粒 表达
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 学术论著
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: R392.1
• 字数: 2705字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1672-8270.2015.05.002

摘要

目的：构建基因PLEKHQ1的原核质粒及真核质粒。方法：全长编码基因PLEKHQ1的聚合酶链反应(PCR)产物经EcoRⅠ和Kpn1双酶切后，分别与双酶切后的载体pGEX-4T-2及载体pCMV-Myc相连，在pGEX-4T-2-PLEKHQ1转化E.coli DH5α提取质粒后，转化E.coli BL21中诱导GST-Q1融合蛋白表达，利用谷胱甘肽琼脂糖4B纯化诱导的融合蛋白；而pCMV-Myc-PLEKHQ1则瞬转至293TX细胞；用蛋白质印迹法(Western blot)检测GST-Q1和Myc-Q1融合蛋白表达。结果：将获得的重组质粒进行双酶切鉴定，得到约1500 bp的目的片段，符合预计大小。质粒经测序分析正确后，Western blot检测到诱导及纯化后的GST-Q1和转染293TX后的Myc-Q1蛋白。结论：成功构建的pGEX-4T-2-PLEKHQ1和pCMV-Myc-PLEKHQ1重组质粒，为深入研究PLEKHQ1功能奠定良好的基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆琤	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0
2	周晨辰	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0
3	张鹏飞	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0
4	张硌	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0