PIAS3的Myc融合蛋白真核表达重组质粒的构建

• 作者: 张俊芳 扬南扬 李晓萌 李江 王中南 甄园丽
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: PIAS3 Myc融合蛋白 重组质粒
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 201-204
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建PIAS3(活化型STAT3抑制蛋白)的Myc融合蛋白真核表达重组质粒,并表达融合蛋白Mye-PIAS3.方法:采用PCR方法,扩增鼠PIAS3基因全长cDNA编码区序列.将该1 851 bp的特异性片段连接到T载体上,将其亚克隆至pCMV-Myc真核表达载体的Sal Ⅰ和Not Ⅰ位点之间.将pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染前列腺癌PC3细胞,利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达.结果;重组pCMV-Myc-PIAS3质粒通过酶切和测序鉴定了其正确性.EcoR 1酶切鉴定时有4 357和1 318 bp2条带,Xba Ⅰ酶切鉴定时有3 291 bp和2 384 bp 2条带,与预期结果一致.测序结果显示,13个氨基酸Myc在N端,然后是阅读框架正确的PIAS3的基因序列.pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染PC3细胞,利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达,在相对分子质量68 000处检测到特异的蛋白表达条带.结论:成功构建pCMV-Myc-PIAS3重组质粒,并表达融合蛋白Myc-PIAS3.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李江	吉林大学口腔医院修复科	84	717	14.0	21.0
2	王中南	东北师范大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
3	李晓萌	东北师范大学生命科学学院	11	21	3.0	4.0
4	张俊芳	东北师范大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0
5	甄园丽	吉林大学口腔医院修复科	1	0	0.0	0.0
6	扬南扬	东北师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0