重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN(1～4)的构建及表达

• 作者: 付晓 张桂敏 朱梦瑜 杨洁 王鑫廷 苏超 葛林 高星杰
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类Tudor-SN蛋白 pGEX-4T-1 重组质粒 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 483-487
• 分类号: Q782
• 字数: 3557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.06.003

摘要

目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuelease)蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与(;"蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN(1～4)重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN(1-4)质粒成功构建和表达.