pEGFP-HSP70重组质粒的构建及其在大鼠神经干细胞中的表达

• 作者: 张婵娟 戚仁斌 朱丽红 王珍 舒晓明 赵佳仪 逯丹 陆大祥
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒 转染 热休克蛋白70 神经干细胞
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 842-846
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4071字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.05.013

摘要

目的:构建重组pEGFP-HSP70质粒并观察其在神经干细胞中的表达.方法:采用RT-PCR方法从SD胎鼠肝组织中获取总RNA,扩增出热休克蛋白70(HSP70)基因的全序列cDNA,并克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2上,经EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ酶切及测序分析对重组质粒pEGFP-HSP70进行鉴定.采用Nucleofector转染技术将重组质粒pEGFP-HSP70转染至胎鼠神经干细胞中.结果:(1)胎鼠HSP70cDNA序列被正确地克隆到真核表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组大鼠pEGFP-HSP70质粒.荧光强度检测空质粒转染组(pEGFP-C2组)、pEGFP-HSP70组与对照组相比显著升高(P＜0.01);pEGFP-HSP70组内24h的荧光强度与7 d(P ＜0.05)、14 d(P ＜0.05)和21 d(P＜0.01)相比降低明显.(2)转染后HSP70的表达在1d(P＜0.05)、7 d(P＜0.01)和14 d(P ＜0.01)与对照组相比均明显升高.结论:神经干细胞可直接作为基因靶细胞,能有效地表达重组质粒pEGFP-HSP70,且HSP70在神经干细胞中的表达与转染时间密切相关.