pEGFP-N1-heNOS重组质粒的构建与鉴定

• 作者: 张建 李建新 汪忠镐 王国栋 谷涌泉 郭连瑞
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人内皮型一氧化氮合酶基因 绿色荧光蛋白 真核表达质粒 基因重组
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 651-655
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 3608字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2007.07.002

摘要

目的:构建pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒.方法:应用基因重组手段,根据人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)基因序列和表达载体pEGFP-N1质粒上的多克隆位点设计了1对引物,对含有heNOS基因的质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS进行了PCR扩增,得到了约3.6 kbp的目的片段.将其插入到载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)报告基因融合,重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定.结果:用PCR方法成功从质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS中扩增出heNOS基因片段,经菌液PCR、酶切及测序鉴定,heNOS基因成功插入到载体pEGFP-N1质粒中,插入目的基因的真核表达载体的酶切图谱与预期一致,并且heNOS基因与Genbank所提供的序列完全一致.结论:成功构建了pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谷涌泉	首都医科大学宣武医院血管外科	135	620	14.0	20.0
2	汪忠镐	首都医科大学宣武医院血管外科	146	800	15.0	20.0
3	张建	首都医科大学宣武医院血管外科	201	1295	18.0	28.0
4	李建新	首都医科大学宣武医院血管外科	60	233	9.0	13.0
5	王国栋	首都医科大学宣武医院血管外科	20	46	4.0	6.0
6	郭连瑞	首都医科大学宣武医院血管外科	56	196	7.0	12.0