表皮生长因子受体胞外区在哺乳动物细胞HEK293T中的分泌表达和鉴定

• 作者: 何阳阳 唐珮 孙志伟 庞晓斌 张畅 杜鹏 王双
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮生长因子受体 胞外区 真核表达 分泌表达 结合活性
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 635-639
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 4355字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.05.002

摘要

目的:融合表达表皮生长因子受体(EGFR)胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原.方法:通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定.结果:经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5 nmol/L.结论:利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王双	军事医学科学院生物工程研究所	31	134	5.0	11.0
2	孙志伟	军事医学科学院生物工程研究所	68	390	10.0	16.0
3	庞晓斌	河南大学药学院	39	129	7.0	9.0
4	张畅	军事医学科学院生物工程研究所	3	20	2.0	3.0
5	杜鹏	军事医学科学院生物工程研究所	5	7	2.0	2.0
6	唐珮	温州医学院护理学院	3	5	2.0	2.0
7	何阳阳	军事医学科学院生物工程研究所	1	2	1.0	1.0