禽呼肠病毒σC基因的表达及ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: 孙敏华 李林林 胡奇林 董嘉文
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 禽呼肠病毒 σC基因 克隆与表达 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-16
• 分类号: S852.659.4|Q786
• 字数: 5044字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.08.003

摘要

将RT-PCR扩增得到的禽呼肠病毒(ARV) S1133毒株的σC基因克隆至pMD-18T-Simple栽体,经酶切及测序鉴定,证明该基因片段为ARV σC基因.将该基因亚克隆至pET32a(+)成功构建了表达栽体pET32a-σC.该重组质粒在大肠埃希菌BL21中经1.0 mmol/L IPTG诱导5h得到最佳表达.pET32a-σC蛋白的分子质量为55 ku,Western blot分析表明,该重组蛋白能与ARV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性.将纯化好的ARV σC蛋白作为包被抗原,确定了该方法的抗原最适包被浓度为2μg/mL,血清的最适稀释度为1 ∶ 400.用建立的ELISA方法检测接种过ARV疫苗的65份临床血清样品,测得44份为阳性,阳性率为67.7％；未接种ARV疫苗的30份血清样品检测结果均为阴性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙敏华	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	15	82	6.0	8.0
2	董嘉文	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	12	59	5.0	7.0
3	胡奇林	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	13	60	5.0	7.0
4	李林林	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	8	42	4.0	6.0