小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备与初步应用

• 作者: 叶玲玲 吕建强 周晓黎 尹尚莲 徐维佳 杨仕标 杨俊兴 王琼 王金萍 祝贺 艾军 花群义 董俊 陈朝银 龙云凤
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫 单克隆抗体 生物学特性,竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 588-595
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 6226字
• 语种: 中文

摘要

针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用.以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗.Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法.结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8.生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b；5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800；血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性；相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点；2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104.应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20％的符合率.本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV 的c-ELISA检测方法.