云南松SSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 何承忠 吕学辉 张瑞丽 段安安 王大玮 许玉兰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 云南松 SSR 优化 正交设计
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 93-97
• 分类号: S791
• 字数: 3411字
• 语种: 中文

摘要

为了建立适宜云南松SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用近缘种火炬松的引物,采用正交设计L16(45)对云南松SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适于云南松的SSR反应体系.在10μL的反应体系中,模板DNA的用量为30.0 ng,Taq DNA聚合酶的用量为1.0 U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物的浓度为0.2 μmol/L.扩增程序为:94℃预变性4 min；94℃变性45 s,48℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环；72℃延长10 min,4℃保存.最后利用1个居群对该体系进行稳定性验证,结果可用于云南松SSR标记的研究.