人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究

• 作者: 倪彬婷 李力群 潘盛盛 高建华
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 血管基质层细胞 脂肪来源干细胞 荧光标记
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 861-864
• 页数: 4页
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础.方法 取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065％、0.125％、0.185％3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs.收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率.用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125％浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况；将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力.结果 0.065％、0.125％及0.185％浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01);细胞成活率分别为91％±2％、90％±2％、81％±2％,0.065％浓度组和0.125％浓度组均显著高于0.185％浓度组(P＜0.01),0.065％浓度组和0.125％浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881).倒置荧光显微镜观察示,0.125％浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光；DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代.MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合.结论 0.125％浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度；DiI可有效标记SVFs.