甜樱桃DELLA蛋白基因PaGAI的克隆与表达分析

• 作者: 刘兰英 刘芳 李天红 沈欣杰 袁华招 钟翡
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甜樱桃 DELLA蛋白 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 143-150
• 分类号: S662.5
• 语种: 中文

摘要

利用RT-PCR和RACE技术从甜樱桃（PrunusaviumL．）嫩叶中克隆了赤霉素信号转导途径中的关键负调控因子DELLA蛋白基因cDNA全序列，将其命名为PaGAI。该基因cDNA全长2310bp，开放阅读框ORF为1788bp，推测其编码一个含有595个氨基酸残基的多肽链，蛋白质分子量约64kD。生物信息学分析结果表明，PaGAI编码蛋白具有DELLA蛋白保守结构域，其N端存在两个非常保守的酸性结构域DELLA和VHYNP作为信号感知区域，C端有VHIID、RVER和SAW结构域作为阻遏区域。PaGAI与其它植物的DELLA蛋白具有较高的同源性，其中与苹果MdRGL2b蛋白同源性最高，达到84％。构建pGEX．4T-1／PaGAI原核表达体系，并转化EcoliBL21，经0．5mmol.L^-1IPTG诱导蛋白表达，SDS．PAGE检测获得了分子质量为91kD的融合蛋白，半定量RT-PCR分析表明，PaGAI在花、果实、叶片、韧皮部中普遍表达，在花与韧皮部中的表达远远强于在果实与叶片中的表达。