Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响

• 作者: 何志娟 刘宣宣 周凤云 徐翀 李文秀 毛伟平 潘杨滨
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 氯化镉 pcDNA 3.0 真核表达 核酸内切酶G(Endo G) HEK-293细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1322-1326
• 分类号: R181.2+3
• 语种: 中文

摘要

目的 观察细胞凋亡因子核酸内切酶G( endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响.方法 从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增Endo G基因,与pcDNA 3.0相连,构建pcDNA 3.0-Endo G真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Western blot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率.结果 成功构建pcDNA 3.0-EndoG真核表达载体,Endo G基因扩增片段大小约1 100 bp;该载体转染细胞后,Endo G成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率＞37％,且随氯化镉浓度增加,Endo G表达量先上升后下降.结论 Endo G以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式.