可用于基因表达研究的转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的构建

• 作者: 任兆瑞 王娟 蒋世忠 谢飞 闫亚彬 黄英
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 转基因小鼠 乳腺上皮细胞 真核表达载体 牛催乳素
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 955-960
• 分类号: R394.2
• 字数: 4534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2012.07.029

摘要

目的 建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台.方法 通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原代培养.经胰蛋白酶纯化后,绘制乳腺上皮细胞生长曲线；免疫组织化学方法检测角蛋白18的表达；透射电子显微镜(透射电镜)观察乳腺上皮细胞超微结构；流式细胞仪检测细胞周期分布；显微镜下分析乳腺上皮细胞核型.将牛催乳素真核表达载体(pCMV-bPRL)转染至转基因乳腺上皮细胞中,检测外源bPRL的表达.结果 乳腺上皮细胞生长曲线呈“S”形；免疫荧光组织化学分析结果显示hTF转基因小鼠乳腺上皮细胞角蛋白18呈阳性表达；透射电镜观察发现乳腺上皮细胞胞核较大、偏位,有双核或多核,胞质丰富,空泡、粗面内质网、高尔基体丰富；流式细胞仪检测结果显示:乳腺上皮细胞增殖活跃,G2/M期+S期细胞占15％；细胞核型分析结果显示处于分裂期的细胞具有正常的二倍体,染色体完整.pCMV-bPRL转染乳腺上皮细胞24 h后,上清液中检测到bPRL的表达.结论 体外培养的转基因乳腺上皮细胞具有类似体内细胞的生物学特征,并可表达真核表达载体,为研究环境因素对乳腺功能的影响及制备乳腺生物反应器提供了一种细胞模型.