旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX的克隆表达及免疫学特性初步分析

• 作者: 占建华 周兴旺 周阳芳 胡旭初 贾飞飞
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 旋毛虫 组织蛋白酶X RACE-PCR克隆 重组蛋白 免疫原性
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 669-674
• 分类号: R383.15
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX,初步探讨其免疫学特性,为研究新的防治方法奠定科学基础.方法 从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列,使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列.半定量RT-PCR分析该基因的转录.构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX,大肠杆菌中IPTG诱导表达,His-tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX；将纯化的重组蛋白40μg/只免疫BALB/c小鼠,免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清,间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度.结果 RACE-PCR克隆出TsCPX全长基因序列,共1227 bp；RT-PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380 bp扩增条带,条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期.E.coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX;重组蛋白免疫小鼠二次后,免疫血清总Igc迅速上升,三次免疫后达到峰值(P＜0.001)；IgG亚类IgG1抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升,亚类IgG2a无明显上升,两者间差异有统计学意义(P＜0.001).结论 成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达,TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性,能引起宿主(小鼠)Th2型为主的免疫应答,具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡旭初	中山大学寄生虫学教研室	108	574	13.0	17.0
5	周兴旺	中山大学中山医学院生化教研室	3	1	1.0	1.0
9	周阳芳	中山大学中山医学院生化教研室	1	1	1.0	1.0
10	贾飞飞	中山大学中山医学院生化教研室	1	1	1.0	1.0
11	占建华	中山大学中山医学院生化教研室	1	1	1.0	1.0