S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9的构建及其对U251细胞生长的影响

• 作者: 廖鹏 程远 邓金木 陈松
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: pEGFP-N3 S100A9 胶质瘤 基因转染
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1596-1599
• 分类号: R394-33|R730.23|R730.264
• 语种: 中文

摘要

目的 构建S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,观察其对胶质瘤细胞系U251内S100A9基因表达及细胞生长的影响.方法 应用RT-PCR和DNA重组技术构建pEGFP-N3-S100A9融合蛋白表达载体,并用双酶切、测序进行鉴定,用脂质体转染胶质瘤细胞系U251细胞.荧光显微镜下动态观察U251细胞绿色荧光的变化；培养24h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白.通过荧光定量PCR (qRT-PCR)观察其mRNA表达情况,Western blot检测其蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 酶切鉴定与S100A9全长基因长度一致(345 bp)；测序证实重组质粒中含有一与GenBank上登录的S100A9基因(NM_002965)序列完全一致的片段,表明成功构建真核表达载体；荧光显微镜下转染U251细胞可见绿色荧光蛋白表达,12h后逐渐增多,24 ～48 h达高峰,且稳定表达较长时间；24 h后通过qRT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到14 × 103目的蛋白表达(P＜0.05),其增殖能力明显增强(P＜0.01),且引起细胞G1期减少,S期增加(P＜0.05).结论 成功构建真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,转染到U251细胞后能有效上调S100A9基因的mRNA及蛋白的表达、促进细胞增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈松	重庆医科大学附属第二医院神经外科	17	74	5.0	8.0
2	程远	重庆医科大学附属第二医院神经外科	117	678	13.0	21.0
3	邓金木	重庆医科大学附属第二医院神经外科	4	24	3.0	4.0
4	廖鹏	重庆医科大学附属第二医院神经外科	3	2	1.0	1.0